分光光度計使用方法及測量原理介紹（精心總結(jié)整理版）

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2012-3-18 10:17 上傳

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原理：

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    分光光度計的基本原理是溶液中的物質(zhì)在光的照射激發(fā)下，產(chǎn)生了對光吸收的效應(yīng)，物質(zhì)對光的吸收是具有選擇性的，各種不同的物質(zhì)都具有其各自的吸收光譜，因此當(dāng)某單色光通過溶液時，其能量就會被吸收而減弱，光能量減弱的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系，也即符合于比色原理---比耳定律。

可見光分光光度計，其波長范圍為360 nm～800 nm或360 nm～1000 nm，具有測量被測溶液透光率（T）值，吸光度(A），濃度直讀，模擬信號輸出等功能。分光光度技術(shù)主要是利用物質(zhì)特有的吸收光譜來鑒定物質(zhì)性質(zhì)及含量的技術(shù)，其理論依據(jù)是Lambert和Beer定律。

使用方法：

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721分光光度計的放大器暗盒及單色器箱處放有兩個硅膠筒，檢測室內(nèi)放硅膠袋，應(yīng)經(jīng)常檢查，發(fā)現(xiàn)硅膠變色（由藍色變成粉紅色），應(yīng)更換新硅膠或烘干再用。儀器較長時間不使用，應(yīng)定期通電、預(yù)熱。儀器用完之后，須拔去電源，套上儀器罩。

操作中不做測定時，應(yīng)將比色槽暗箱蓋打開，以防光電管長時間受輻射，導(dǎo)致光電管疲勞、壽命減短。

（1）分光光度計的正確預(yù)熱方法[1]

① 嚴格遵循各類型號儀器使用說明書，按要求在儀器接通電源前，對電源線、接地線予以檢查；儀器的各個旋鈕起始位置應(yīng)正確（選擇開關(guān)置于T，靈敏度旋鈕置于1）。然后開啟電源。

② 打開比色池暗箱蓋(此時光欄閘門關(guān)閉，光路自動關(guān)閉)，選擇所需波長和靈敏度檔位，將去離子水適量注入所用比色池內(nèi)，此為參比，調(diào)節(jié)“0％T”投射比旋鈕，使電表指針置“T=0”。蓋上比色池間暗蓋，使光欄閘門打開，光敏元件受給定波長光的照射，調(diào)節(jié)“100％T”旋鈕，使電表指針置“T=100％”或上限位置,預(yù)熱20min,或按說明書預(yù)熱一定的時間。

（注：對于帶黑體的部分儀器，如721-P，此步驟應(yīng)為：打開比色池暗箱蓋，放入黑體和參比溶液比色皿，首先將黑體置入光路，調(diào)節(jié)“0％T”投射比旋鈕，使電表指針置“T=0”；然后將參比溶液比色皿置入光路，調(diào)節(jié)“100％”投射比旋鈕，使電表指針置“T=100”；預(yù)熱20 min,或按說明書預(yù)熱一定的時間。）

（以下這種預(yù)熱方法是錯誤的：儀器預(yù)熱。打開樣品室蓋（光門自動關(guān)閉）。開啟電源，指示燈亮，儀器預(yù)熱20 min。選擇開關(guān)置于“T”旋鈕，使數(shù)字顯示為“00.0”。）

（2）預(yù)熱完畢后，最好再次打開暗箱蓋，調(diào)整“0％T”投射比旋鈕使T=0。（對于帶黑體的部分儀器，如721-P，將黑體置入光路，調(diào)節(jié)“0％T”投射比旋鈕，使電表指針置“T=0”）

（3）將裝有參比溶液和待測溶液的比色皿放置比色架中（注意：手持比色皿的毛玻璃面；裝樣量為比色皿高度的3/4左右；用濾紙吸干比色皿外部的溶液，用鏡頭紙擦拭透光面；之后檢查比色皿光面干凈無痕跡即可；比色皿放入時比色皿的箭頭方向應(yīng)與光路照射方向一致。比色皿使用前用待裝溶液沖洗）。令參比溶液置于光路。

（4）蓋上樣品室蓋，調(diào)節(jié)透光率“100％T”旋鈕，使數(shù)字顯示為“100.0T”（如顯示不到100％T，則可加按一次）。然后將選擇開關(guān)轉(zhuǎn)換至A調(diào)零旋鈕，數(shù)字顯示應(yīng)為“.000”；如不到“.000”，可按下“100％T”旋鈕調(diào)整。

（5）吸光度A的測量：拉出拉桿，使被測溶液置入光路，數(shù)字顯示值即為試樣的吸光度A。

（6）測定完畢后，先打開樣品室蓋，再斷電源。比色杯應(yīng)清洗干凈后，再貯放保存。

其他功能：

（1）濃度直讀： 按MODE鍵，使CONC指示燈亮，將已標(biāo)定濃度的溶液移入光路，按下溶液調(diào)節(jié)鍵（↑100％T鍵的↓0％鍵），使數(shù)字顯示為標(biāo)定值，將被測溶液移入光路，即讀出相應(yīng)濃度值。

（2）儀器數(shù)字顯示背后，裝有接線柱，按下FUNC鍵，可輸出模擬信號

說明：

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1. 透射比(亦稱透射率)與吸光度

透射光強度(It)與入射光強度(I0)之比稱為透射比(亦稱透射率)，用T (transmittance [træns'mitəns])表示，則有：

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圖 1

溶液的T越大，表明它對光的吸收越弱；反之，T越小，表明它對光的吸收越強。為了更明確地表明溶液的吸光強弱與表達物理量的相應(yīng)關(guān)系，常用吸光度(A，absorbance [əb'sɔ：bəns])表示物質(zhì)對光的吸收程度，其定義為：

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圖 2

則A值越大，表明物質(zhì)對光吸收越強。T及A都是表示物質(zhì)對光吸收程度的一種量度，透射比常以百分率表示，稱為百分透射比，T％；吸光度A為一個無因次的量，兩者可通過上式互相換算。

2. 朗伯－比耳定律的常用表達式

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圖 3

液層厚度為b，濃度為c，吸光度為A

參考文獻：

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[1] 董敏. 分光光度計的預(yù)熱及其常見錯誤分析

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